之前蹲在操作台耗了一下午，最后提出来的东西电泳条带糊成一团，才沉下心去捋dna提取过程中应注意哪些操作，很多点不是书本上写的条条框框，是手上反复试出来的细碎感受。

拿样本的时候动作慢一点，别来回反复吹打。当时贪图混匀速度，移液枪吸了又打、打了又吸，管子里的液体起了细密的泡沫，后续测浓度看着数值还行，跑胶之后就乱掉。后来才反应过来，剪切力会把长链的核酸扯碎，不是看不见就等于没破坏，泡沫本身就是一个信号，只要液面开始发泡，大概率已经伤到模板了。

离心这一步，转速和时间不要凭着感觉微调。同一批样本，两管放在离心机里位置不对称，不平衡带来的震动会让管壁上的沉淀松动，上清里面混进去杂质。配平这件事看着简单，很多时候随手拿一管清水凑重量，差个几十毫克觉得无所谓，最后杂质多到洗不干净。离心结束开盖也不能急，不要猛地掀开盖子，气流扫过管底的沉淀，很容易把沉淀吹起来。

用到的枪头、离心管，尽量选无酶的。不是说普通耗材一定做不出来，只是环境里到处都有降解酶，稍微沾到一点，放一会核酸就慢慢分解。操作台面上经常会飘别人溅出来的裂解液，擦台面的时候，别直接对着样本管喷消毒液，水雾飘进去，整套样本就废掉。手套也要勤换，摸过手机、记录本之后，指尖带的东西很容易带进体系里。

温度控制是很容易被忽略的一块。裂解孵育的时候，水浴锅温度飘高一点，蛋白消化倒是快了，可核酸稳定性跟着往下掉；温度太低，裂解不充分，最后得率很低。有一回水浴的盖子没盖严，温度掉了两三度，同样的配方、同样的时间，那一整批样本都没拿到合格产物。

洗沉淀的时候，加洗涤液下去，不要用力震荡。

轻轻颠倒几次管子就够，靠液体浸润沉淀，而不是使劲晃。晾干的分寸更难拿捏，晾太久，沉淀干得发硬，后续很难溶开，溶解之后浓度上不去；晾的时间不够，残留的乙醇会抑制后续的反应，就算提出来，拿去扩增也很难出结果。我一般就放在通风的地方，盯着沉淀从白色变成半透明，差不多就加洗脱液，这个节奏没有固定数值，看多了才有一点感觉。这只是我的个人感受，不是标准答案。

洗脱用的缓冲液提前回温会好一点，常温的液体溶解沉淀比冰的快很多。加完之后不要立刻离心，静置几分钟，让核酸充分泡开，再上机收集上清。也不要反复冻融提好的dna，分装成小份存放，一次拿一管，反复冻个两三回，条带就会慢慢弥散。

做实验的时候，顺序也有讲究，先处理容易降解的样本，不要全部样本都裂解完堆在一边等着。样本放久了，内源的酶持续起作用，再好的操作也救不回来。有人习惯全部配好试剂再统一开工，我试过一次，后排的样本耽搁太久，最后出来的质量参差不齐，之后就改成处理一管接着下一管，尽量压缩样本暴露的时间。

那天收拾台面的时候，看着好几管失败的样本，没有特别懊恼，就是觉得很多操作的分寸没法用文字卡死，很多边界只能自己一点点摸。